Постановка эксперимента

Сеголетки карпа были распределены на три группы, которые содержались в разных аквариумах:

- контроль (интактные рыбы, которые содержались в чистой воде);

- опытная группа (в аквариумы добавляли раствор ацетата свинца расчета 0,5 мг/ дм3) (ПДК - 0,1 мг/дм3);

- опытная группа (в аквариумы добавляли раствор сульфат марганца из расчета 0,1 мг/ дм3) (ПДК - 0,01 мг/дм3) (Минина, 2003; Волошина, 2006).

В аквариумах создавались условия постоянного температурного (t 19-210C) и газового режима. Биохимические анализы проводили на 5, 15, 30 и 40 дни эксперимента по следующему показателю  динамика общих липидов и общего холестерина в сыворотке сеголеток карпа в норме и при хронической интоксикации ионами марганца и свинца.

Методика определения содержания общих липидов в сыворотке крови (Chromy et al., 1975)

Набор реактивов для приготовления 290 мл рабочего раствора для определения общих липидов в сыворотке крови. Объем достаточен для 180 анализов.

Принцип метода:

Ненасыщенные липиды и жирные кислоты, фосфолипиды и холестерин взаимодействуют после гидролиза серной кислоты с фосфованилиновым реактивом с образованием красного окрашивания.

Реактивы:

. Стандартный раствор (8 мл)

общие липиды 8 г/л

. Раствор ванилина (290 мл)

ванилин 10 ммоль/л, кислота ортофосфорная 11,5 моль/л

Состав реакционной смеси:

Ванилин 9,4 ммоль/л

Кислота ортофосфорная 10,8 ммоль/л

Кислота серная 1,1 моль/л

Соотношение сыворотка/реакционная смесь 1/1230

Референтные величины:

(нтБ) С - Общие липиды, (г / л) 4-8

Приведенный диапазон референтных значений является ориентировочным.

Воспроизводимость:

Около ± 5%

Вспомогательный раствор (не входит в состав набора)

Кислота серная конц., ч. д. а.

Проведение анализа:

Длина волны (510-550) нм

Кювета 1 см

Температура (+15 до +25)°С

В трех пробирках смешивают серную кислоту конц., ч. д. а. в соотношении 75+1 с сывороткой (проба), реактивом 1 (стандарт) или дистиллированной водой (контрольный раствор), перемещивают и нагревают 15 мин на кипящей водяной бане (напр.1,5 мл серной кислоты конц. ч. д. а. и 0,02 мл сыворотки, реактив 1 или дистиллированной воды). После охлаждения пробирок проточной водой смешивают гидролизат с реактивом 2 в объемном соотношении 1+15 и оставляют стоять 50 мин при температуре (с +15 до +25)°С (напр.0,1 мл гидролизата пробы, стандарта или контрольного раствора и 1,5 мл реактива 2). Не позднее чем через 60 мин измеряют оптическую плотность пробы (А1) и стандарта (А2) против контрольного раствора.

Отмерить (мл)

Проба

Стандарт

Контрольный раствор

Сыворотка Реактив 1 Кислота серная конц.

0,02 1,50

- 0,02 1,50

- 1,50

Перемешивают и нагревают 15 мин на кипящей водяной бане. После охлаждения пробирок проточной водой отмеряют

Гидролизат Реактив 2

0,10 1,50

0,10 1,50

0,10 1,50

Перемешивают и оставляют стоять 50 мин при (+15 до +25)°С. Не позднее чем через 60 мин измеряют оптическую плотность пробы (А1) и стандарта (А2) против контрольного раствора

Расчет:

Общие липиды (г/л) = 8 × А1/А2

Методика определения содержания общего холестерина в сыворотке крови (Fishbach, Dunning, 2004)

Набор реагентов для определения концентрации общего холестерина в сыворотке и плазме крови энзиматическим колориметрическим методом.

Принцип метода:

Холестерин из состава эфиров высвобождается под действием фермента холестеринэстеразы (ХЭ). При участии фермента холестериноксидазы (ХО) холестерин окисляется до 4-холестен-3-она. Освобождающаяся перекись водорода, при участии фермента пероксидазы, способствует окислительному азосочетанию 4 - аминоантипирина (4-ААП) и фенола с образованием окрашенного соединения (хинониминовый краситель). Интенсивность окраски реакционной среды пропорциональна содержанию холестерина в исследуемом материале и определяется фотометрически при длине волны 500 (490-520) нм.

Перейти на страницу: 1 2


Другие статьи

Круговорот кислорода. Защита литосферы. Качество животного мира
С тех пор как человек существует на Земле, он непрерывно взаимодействует с окружающей его природой. Взаимодействие это носит как непосредственный характер, так и опосредованный. Основу непосредственного взаимодействия человека с окружающей его природной средой составля ...

 
 
 

2018 Копирайт : www.ecologyreality.ru